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本试剂盒采用Buffer MACL和Buffer MCL裂解颊粘膜细胞，释放出基因组DNA，在结合液的作用下SgMag Beads选择性的吸附裂解液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗除去SgMag Beads吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下SgMagBeads释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。采用本制品提取颊粘膜细胞基因组DNA无需苯酚、氯仿等有毒试剂。获得DNA的OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。

• 自备材料：磁力架、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、水浴锅、1.5mL离心管、70%乙醇和RNase A溶液（10mg/mL）。
  
• 每次使用前请检查Buffer MACL和Buffer MCL是否出现沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解使用。

• 取样：采用口腔拭子在口腔内壁擦拭6～10次，晾干2h保存。
  
  • 为确保样本不被食物或者饮品污染，取样前30min内请勿进食和饮水。
• 将在口腔内壁擦拭过的口腔拭子用剪刀将棉签部分从其杆上剪下置于2mL离心管，向离心管中加入300μL Buffer PBS。
  
  • 如果需要无RNA的基因组DNA，可以向离心管中加入20μL 10mg/mL RNase A溶液。
• 向离心管中加入300μL Buffer MACL，150μL Buffer MCL和20μL Proteinase K，震荡混匀，65℃水浴20min，间或混匀。
  
• 水浴完成之后吸取550μL上清液转移至新的离心管中。
  
  • 水浴完成之后可以短暂离心将拭子离心至管底部，利于吸取上清液。
• 向离心管中加入400μL Buffer MA和25μL SgMag Beads，振荡或者颠倒混匀，室温静置3min，间或混匀。
  
  • 向离心管中加SgMag Beads之前，请将其充分混匀。
    
  • 请务必将SgMag Beads加至液面以下，尽量将枪头上残留SgMag Beads吸打干净。
• 将离心管置于磁力架上30 s，待SgMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量SgMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入SgMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 向离心管中加入700μL 70%乙醇，吸打或者点振混匀，将离心管置于磁力架上30 s，待SgMag Beads完全吸至管壁之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量SgMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入SgMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤7一次，室温开盖干燥10min或者55℃恒温箱内开盖干燥5min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有SgMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
• 向离心管中加入50μL TE Buffer (pH8.0)，65℃水浴5min，间或混匀。
  
  • 请将管壁上所有的SgMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 根据实验需要可以将TE Buffer用无菌的双蒸水（pH>7.5）代替。
• 取出离心管并置于磁力架上30 s，待SgMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保SgMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入SgMag Beads，否则影响基因组DNA的纯度。

• 得率低
  
  • 口腔拭子保存不当导致细胞破裂DNA降解；请采用新鲜口腔拭子，需要保存时请采用适当的保存液。
    
  • 口腔拭子的种类繁多，最好采用植绒拭子，植绒拭子吸附和释放口腔上皮细胞的性能最好，而且吸水性不好，更有利于细胞的裂解。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MA和SgMag Beads之后，请将其充分混匀，并使SgMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失SgMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的SgMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的SgMag Beads也吸附至管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有SgMag Beads溶解在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5min，常温条件下SgMag Beads只能释放少量的基因组DNA，65℃条件下SgMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，SgMag Beads释放出大量的基因组DNA。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间不要超过30min。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求保存。请使用新鲜样品，样品如果因为某些原因必须先行保存，可以将样品保存于-70℃冰箱。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清后从磁力架上取出离心管，放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s，吸净管底的液体。
    若出现残液的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s，吸净离心管内的液体。
    
  • SgMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后，请充分混匀，使SgMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
    
  • SgMag Beads没有完全干燥。请将SgMag Beads完全干燥，保证无乙醇残留。
    
  • 最后一步吸取上清时吸入SgMag Beads。请确保所有SgMag Beads吸至管壁上之后，再吸取上清。如果不小心吸入SgMag Beads，请将上清液放回原管，待SgMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min，再取上清。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。